植物病害免疫学诊断技术是伴随着医学免疫学及动物医学免疫学的不断发展而发展起来的, 它是以抗原与抗体的特异性反应为基础而发展起来的一种技术, 不仅迅速、可靠, 而且应用方便。早在 1918 年, 该技术就已经应用于植物病原细菌的检测, 至今, 已经发展成为一门成熟的技术。非标记免疫分析又称传统免疫分析, 它是利用抗原-抗体反应后理化性质的变化对抗原抗体进行测定的方法。根据手段不同, 又可分为凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、免疫电泳等。标记技术克服了非标记技术灵敏度不高, 缺乏可供测量的信号等缺点。利用放射性、荧光或酶等物质标记抗原或抗体, 再利用抗原抗体反应的特异性, 使得灵敏度大大提高, 同时检测的方法和类型也有了更多的变化, 主要有荧光标记免疫分析、放射性标记免疫分析、发光免疫分析、免疫酶分析、免疫胶体金快速诊断技术。

它不仅具有免疫荧光法和放射免疫法的反应灵敏、特异性强的优点, 而且克服了常规血清学方法受病原菌浓度、粒体形态和抗血清用量等限制的缺点, 是目前免疫测定中最常用的技术之一。目前, 植物病菌检测仪己被广泛用于生物学、医学和农业等许多领域, 可成功的对病毒、真菌、细菌、线虫等抗原及抗体检测, 从而对病害作出诊断。当标本中待测抗原浓度相当高时, 过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合, 而不再形成夹心复合物, 所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可, 因此, 对小分子抗原的测定常用此法。该法的优点是快, 因为只有一个保温洗涤过程。但需用较多量的酶标记抗原为其缺点。

当抗原材料中的干扰物质不易除去, 或不易得到足够的纯化抗原时, 可用此法检测特异性抗体。如抗原为高纯度的, 可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质, 直接包被不易成功, 可采用捕获包被法, 即先包被与固相抗原相应的抗体, 然后加入抗原, 形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质, 然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。间接法是检测抗体最常用的方法。本法只要更换不同的固相抗原, 可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。但不如双抗体夹心法灵敏性高。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗体建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果, 但应尽可能予以纯化, 以提高试验的特异性。

目前, 免疫分析发展状况是多种方法并存, 相互竞争, 相互补充。非放射免疫分析相对放射免疫分析更具有综合优势和潜力, 发展速度更快。不管怎样, 目前还没有一种免疫分析技术是完美无缺的, 各种技术还需要不断发展和完善, 并且人们还在不断研究, 以开发出更新更理想的免疫分析技术。在进行病害诊断操作中, 诊断者要根据标本情况和实验条件, 灵活选择其中一种或两种方法, 进行准确无误的诊断。诊断的准确性既依赖诊断方法是否准确, 以及设备条件和标本处理情况; 又依赖诊断者的经验、技能等。中国粮油仪器网    http://www.grainyq.com/