凯氏定氮法虽然创建已经有近100年的历史，但直到现在它仍然是测量蛋白质最常用的方法。在50年代凯氏定氮法的蒸馏过程大部分直接加热的。现在的实验室中，全自动定氮仪已经取代了凯氏定氮仪，测量过程更加快速准确，使用也更加方便。

　　今天主要说一些凯氏定氮法测定蛋白质含量的一些问题与建议。关于滴定过程,现在硼酸已经取代了标准盐酸或硫酸用以吸收蒸馏出来的氨水。国内某些单位的分析室也有采用自动滴定装置的,这里不准备介绍了。

　　1、用凯氏定氮法测定多种元素的建议

　　自从凯氏法问世以来,不少研究工作者建议结合有机质的消化过程,把土壤中的矿物质也同时分解完全,在消化液中测定“N和P、“N和K或其他更多一些的元素,1975年Pabinson等8,提出以凯氏的消化体系为基础,用含有过氧化氢、硒和硫酸铿的硫酸混合液来消化土壤和植株样品,测定项目包括N、P、K、Na、Ca、Mg、Fe以及Cu、Mn、Zn等各个元素。现将这个方法简介如下:

　　试剂配制:

　　在350毫升H:中,加入0.42克Se粉,14克LiZSO;,H:O混合均匀,然后在边搅拌边冷却下小心地加入420毫升硫酸(比重1.84)。制成的混合消化液在1OC下保存。

　　方法:

　　称取一定量的通过0.5毫米筛孔的(在IOSOC下干燥)样品(植株为0.4克,土壤为0.2克),置于50毫升长颈回流烧瓶中。加4.4毫升混合消化液,在电热器上用小火慢慢加热,反应平稳后加大火力直到残留的有机质的微黄色消失,继续消化20分钟(一般共需1.5小时)。溶液冷却后再根据需要加以稀释,用下列方法进行N、P、K及主要矿质离子的测定。

　　N—用艾杜酚兰(idophenolblue)比色法P—用钒铂黄比色法K、Na—用火焰光度计法测定Ca、Mg—用原子吸收光谱法测定(每公升加入400毫升La,并加入HZSO使最终溶液中含1%的H声04K—用磺化红菲绕琳(sulphonatedbathophenantholine)比色法Cu,Mn和Zn—用原子吸收光谱法测定根据Pakinson的研究,含有过氧化氢,硒粉及硫酸铿的硫酸溶液,能够破坏植物组织、土壤有机质和矿物质,使矿质离子及N、P元素完全进人溶液。由于混合消化液中Se的含量很低,不会对磷的测定产生干扰,少量的硫酸铿既能提高消化液的温度,缩短消化时间又不会影响K、Na的测定,但硫酸锉用量不宜过多。Pakinson还指出,用这种消化法获得的结果与常用的混合酸或凯氏消化法获得的结果相当一致。

　　2、凯氏定氮法消化过程中康气处理问题

　　在早期的分析工作中,湿法消化时所产生的浓烟,(主要是505、S()2、COZ、HoO)不是由通气橱抽排出去的,而是将它们吸收在氢氧化钠溶液或其它溶液中(在消化瓶上加塞,以玻璃管引导气体进人NaOH溶液,再把气体从NaOH溶液中排出。在导人气体和排出气体的两支玻璃管上,都附有几个保险球)。这样,实验室中并不感觉到有污染的气体,我们也曾经建议把凯氏法消化时所发生的气体导人1NNaOH溶液中,再用标准的氧化液滴定碱液中所吸收的502,从还原性气体的含量而计算出有机碳的当量,这样就可以把定氮和定碳结合进行。虽然这个方法对碳的回收值要比通用的K:CZO7-H:50剂消化法低一些,但这也说明,湿法消化在没有通气橱设备时,也是可以进行的。

　　如果消化是在铝块消煮器中进行的,则可将浓烟汇合在一个玻璃管中并导人40%的NaOH溶液中,再通人下水道排放出去。

　　早期的实验证明,应用颈长为30厘米凯氏消化瓶,塞上带有玻璃管的橡皮塞后加热,将冒出来的气体导人到吸收液中,而瓶口附近回流的气体并不腐蚀橡皮塞,当然,对分析结果也无影响。因此,我们认为在铝块加热器上消化用的试管可以不采用玻璃接口,而改用有弹性的耐腐蚀的橡皮塞,这样可以防止消化时漏气。目前,在国外市场上虽然有几种定型的自动分析仪供钱的蒸馏和滴定用,但是在国内一般的实验室中对于凯氏消化法也已作了许多改进,主要是简化设备,加速分析步骤等,收到了较好的效果,因而似无必要向国外购置成套的自动分析仪。