如何检测人工栽培中药材的农药残留
来源： http://www.grainyq.com/ 类别：实用技术 更新时间：2013-01-29 阅读次
【本资讯由中国粮油仪器网提供】 近年来，随着中药材的需求量扩大，天然的中药材已不能满足市场供给需求，目前大部分中药材依赖人工栽培。为提高种植中药材产量，药农按照种植农作物的方法频繁使用农药。为此，世界卫生组织曾在制定植物药的一般检验方法和质量标准时提出农药残留量测定的问题。目前，农药残留量的检测方法主要有气相色谱法、气相色谱－质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱－质谱联用法和薄层色谱法及农药残留速测仪法等。农药残留中的有机磷类农药分子量较小，易气化，适合于气相色谱测定。本研究采用乙腈为提取溶剂，样品浓缩干燥后经石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱提纯，丙酮定容，通过DB－7毛细管柱和FPD检测器进行气相色谱定性和定量。样品预处理步骤简单，具有较高的灵敏度、准确度和精密度，适合在基层单位推广使用。
将装有农药标准品敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、乐果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、杀扑磷的安瓿瓶从冰箱中取出，室温放置15min后打开，分别吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成浓度均为1.0μg/mL的有机磷类混合标准使用溶液，待用。取供试品，粉碎，过二号筛，取约5.0g(准确至0.01g)于50mL具塞离心管中，加入乙腈30mL，超声提取30min，离心，取上清液，过无水硫酸钠脱水，脱水后的溶液收集于100mL平底烧瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超声，离心，脱水，液体合并于平底烧瓶中，45℃水浴减压浓缩近干，待下一步净化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL预淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱，弃去淋洗液，平底烧瓶中的浓缩提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗涤3次，每次1mL，洗液过石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱，液面到达石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脱，收集此洗脱液15mL于50mL平底烧瓶中，浓缩近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋涡混匀，样品上气相色谱进行分析。色谱条件：色谱柱：DB－17毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；载气：氮气，纯度≥99.999%；进样口温度：250℃；进样方式：不分流进样；FPD检测器；检测器温度：270℃；柱温：采用程序升温，初始温度70℃(保持2min)，以每分钟25℃升至150℃(保持0min)，以每分钟3℃升至200℃(保持0min)，以每分钟8℃升温至230℃(保持5min)；进样量为1.0μL。有机磷标准曲线的制作准确吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有机磷类混合标准使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混匀，有机磷类混合标准系列浓度分别为0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接测定使用液。取1.0μL各浓度标准溶液进行气相色谱测定，以不同有机磷农药出峰的保留时间定性，峰面积定量。以每种有机磷农药的不同浓度所对应的峰面积绘制10种有机磷农药的标准曲线。
根据10种有机磷农药的标准色谱图各组分的保留时间定性，外标法定量。10种有机磷农药的标准色谱图。将5个浓度标准系列的混合标准溶液分别上机分析，以各有机磷农药的峰面积对浓度做标准曲线，以3倍信噪比计算各农药的检出限(LOD)，以10倍的信噪比计算各农药的定量限(LOQ)。线性方程、相关系数、最低检出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系。方法的最低检出限为0.0058～0.060mg/kg，其中6种有机磷残留物的检测限＜0.010mg/kg，符合多残留检测要求。最低定量限为0.019～0.20mg/kg。
在相同的色谱条件下，对已制备的大黄、甘草、党参、黄芪、枸杞子5种中药材进行有机磷农药残留加标回收测定，混合标准溶液添加量为0.5mg/kg，平行测定6次，样品加标回收率和精密度试验。10种有机磷农药加标回收率在67.1%～120.0%之间，相对标准偏差(RSD)＜6.0%，该检测方法符合多种农药残留量的要求。
农药残留的提取是农药残留检测中很关键的一步，“常用的提取剂有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作为极性较强并与水相溶的提取溶剂，能溶解多数农药，且过滤和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物组织中的油脂和色素，为下一步净化带来困难。乙酸乙酯萃取脂溶性物质，提取机磷类农药的能力较差。乙腈极性较大，分子小，作为提取溶剂，可有效减少中药材中含有的色素或脂肪等成分对后续的净化分析带来的影响，被美国分析化学家协会(AOAC法)所采用，也是我国目前常用的提取溶剂，适合有机磷类农药的提取，且操作简单，在有机磷农残测定中是首选提取溶剂。
针对有机磷农药测定特点，国内外推荐3种净化方式：C18固相萃取、单一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取”。在有机磷农药样品净化的过程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂类成分，采用单一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但对植物脂肪无法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分开使用，增加样品净化操作步骤。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串联固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等杂质，样品净化效率较高且减少净化步骤，目前在有机磷农残测定的样品净化中作为首选方法。
将装有农药标准品敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化乐果、乐果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、杀扑磷的安瓿瓶从冰箱中取出，室温放置15min后打开，分别吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成浓度均为1.0μg/mL的有机磷类混合标准使用溶液，待用。取供试品，粉碎，过二号筛，取约5.0g(准确至0.01g)于50mL具塞离心管中，加入乙腈30mL，超声提取30min，离心，取上清液，过无水硫酸钠脱水，脱水后的溶液收集于100mL平底烧瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超声，离心，脱水，液体合并于平底烧瓶中，45℃水浴减压浓缩近干，待下一步净化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL预淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱，弃去淋洗液，平底烧瓶中的浓缩提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗涤3次，每次1mL，洗液过石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱，液面到达石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脱，收集此洗脱液15mL于50mL平底烧瓶中，浓缩近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋涡混匀，样品上气相色谱进行分析。色谱条件：色谱柱：DB－17毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；载气：氮气，纯度≥99.999%；进样口温度：250℃；进样方式：不分流进样；FPD检测器；检测器温度：270℃；柱温：采用程序升温，初始温度70℃(保持2min)，以每分钟25℃升至150℃(保持0min)，以每分钟3℃升至200℃(保持0min)，以每分钟8℃升温至230℃(保持5min)；进样量为1.0μL。有机磷标准曲线的制作准确吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有机磷类混合标准使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混匀，有机磷类混合标准系列浓度分别为0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接测定使用液。取1.0μL各浓度标准溶液进行气相色谱测定，以不同有机磷农药出峰的保留时间定性，峰面积定量。以每种有机磷农药的不同浓度所对应的峰面积绘制10种有机磷农药的标准曲线。
根据10种有机磷农药的标准色谱图各组分的保留时间定性，外标法定量。10种有机磷农药的标准色谱图。将5个浓度标准系列的混合标准溶液分别上机分析，以各有机磷农药的峰面积对浓度做标准曲线，以3倍信噪比计算各农药的检出限(LOD)，以10倍的信噪比计算各农药的定量限(LOQ)。线性方程、相关系数、最低检出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系。方法的最低检出限为0.0058～0.060mg/kg，其中6种有机磷残留物的检测限＜0.010mg/kg，符合多残留检测要求。最低定量限为0.019～0.20mg/kg。
在相同的色谱条件下，对已制备的大黄、甘草、党参、黄芪、枸杞子5种中药材进行有机磷农药残留加标回收测定，混合标准溶液添加量为0.5mg/kg，平行测定6次，样品加标回收率和精密度试验。10种有机磷农药加标回收率在67.1%～120.0%之间，相对标准偏差(RSD)＜6.0%，该检测方法符合多种农药残留量的要求。
农药残留的提取是农药残留检测中很关键的一步，“常用的提取剂有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作为极性较强并与水相溶的提取溶剂，能溶解多数农药，且过滤和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物组织中的油脂和色素，为下一步净化带来困难。乙酸乙酯萃取脂溶性物质，提取机磷类农药的能力较差。乙腈极性较大，分子小，作为提取溶剂，可有效减少中药材中含有的色素或脂肪等成分对后续的净化分析带来的影响，被美国分析化学家协会(AOAC法)所采用，也是我国目前常用的提取溶剂，适合有机磷类农药的提取，且操作简单，在有机磷农残测定中是首选提取溶剂。
针对有机磷农药测定特点，国内外推荐3种净化方式：C18固相萃取、单一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串联固相萃取”。在有机磷农药样品净化的过程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂类成分，采用单一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但对植物脂肪无法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分开使用，增加样品净化操作步骤。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串联固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等杂质，样品净化效率较高且减少净化步骤，目前在有机磷农残测定的样品净化中作为首选方法。
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