叶绿素是一类与光合作用密切相关的色素。植物在光合作用时，所需的原料--光就是通过叶绿素吸收的，同时植物光合作用还需要二氧化碳、水分等物质，通过光的照射，合成植物能够吸收利用的有机物。高等植物叶绿体中的叶绿素主要有叶绿素a 和叶绿素b 两种（分子式： C40H70O5N4Mg）属于合成天然低分子有机化合物。下面介绍下如何提取植物叶绿素。当然如果我们需要测定叶绿素的含量，我们推荐您使用叶绿素仪或者手持叶绿素仪，手持叶绿素仪是可以带到田间，拿在手上测定植物叶绿素的含量的。它是一款小巧的仪器，只需将叶片放在仪器的一个带有光线的位置，然后仪器的显示屏上就能够实时显示植物叶绿素的含量。

1：把新鲜的叶子剪碎，放在烧瓶中，加水使之淹没。用酒精灯加热煮沸，倒去水后，加入70～75％酒精（所加的量，仍以淹没为宜）。在瓶口插上一个玻璃漏斗，把烧瓶放在水浴锅中加热煮沸。若没有水浴锅，可用大烧杯代替。由于叶子内的色素溶解在酒精中，所以烧瓶内的溶液逐渐变为深绿色。然后过滤（过滤时，滤纸要用70～75％的酒精润湿，并且要紧贴在漏斗壁上）。 取3毫升滤液放入一支干净试管，再加入5毫升汽油和几滴水，用大拇指按紧管口，上下摇动几分钟，在试管架上 放置片刻后，则溶液分成上下两层，上层是轻的汽油层，主要含有叶绿素及胡萝卜素，故显绿色。下层是酒精层，主要含有叶黄素，故显黄色。

2：制取叶绿素

萃取叶绿素的萃取罐一般用6毫米厚的钢板焊接而成。

①萃取溶剂的选择

萃取溶剂通常用高浓度丙酮为最佳，因为叶绿素极易溶于丙酮，且丙酮的沸点低(56.2℃)，易浓缩也易回收。加热浓缩时叶绿素热分解物少，产品色调好，达到终点温度低，时间短。

②萃取叶绿素的操作与条件

i．投料 投料前在抽提罐的钢筛板上垫上竹筛或滤布。经试气后确定无漏气时，将软化后的蚕粪由投料口投入。

ii．脱水 蚕粪水洗、软化需要水，但若含水较多，则一方面使丙酮浓度降低，不易浸出叶绿素，相反地脂肪、蜡份及一些水溶性色素却会在其萃取液中增加其比例；另一方面，由于萃取液丙酮浓度偏低，含水相对增多，对浓缩收糊造成困难。因此，脱水这一步也是决定产品质量优劣的重要一环。

iii．萃取叶绿素 由于叶绿素在蚕粪(固相)与溶剂丙酮(液相)之间的分配是有一定规律的，要实现叶绿素由固相向液相迅速转换，就必须控制好萃取的条件。

a．丙酮浓度 一般是96％以上为佳，丙酮浓度的调节有时也结合脱水程度、萃取浴比等因素进行考虑。

b．萃取的时间和温度 生产中萃取时既想提高叶绿素萃取率，又希望尽量缩短时间，以充分发挥设备的作用。缩短时间可以通过提高温度、使用回流和增加丙酮的途径来实现。

c．萃取液的pH值调节 蚕粪中含有氨，而且往往混有石灰，因此萃取液呈碱性(pH7.5～8)这样可以保持叶绿素的稳定性，而且可以避免设备的腐蚀。但钙离子的存在会使叶绿素形成不易溶于丙酮的叶绿酸钙而损失掉，另一方面，丙酮在反复使用中会受其影响而变质。因此最好将pH值调节在中性或微酸性范围内。

③浓缩产品及溶剂回收

i．叶绿素蒸发浓缩的设备，即浓缩罐，通常采用夹套式蒸发器。

ii．浓缩的操作与条件

a．操作 将叶绿素萃取液通过流量计注入浓缩罐。通入蒸气于浓缩罐夹套中，加热叶绿素浓缩液，使丙酮受热蒸发至冷凝器冷凝，以达到回收溶剂之目的。丙酮蒸发的同时，叶绿素萃取液开始浓缩，用蒸汽加热时，要经常注意气压的变化，以防止温度突然升高。当叶绿素液浓缩到一定程度后，可升高温度，以便将残留的丙酮驱除。浓缩完成后趁热放料，冷到常温时，叶绿素呈糊状浮于表面，放去下层黑褐色下脚水，即为成品。最后，将多批成品搅拌混合4小时以上，即可装桶。

b．条件 蒸发浓缩的过程中，混合液的沸点是随着液体中溶质的浓度增大而逐步上升的，纯丙酮的沸点为56.2℃，而叶绿素丙酮液的共沸点是不断变化的。

控制共沸点不但能保证叶绿素的质量，而且与回收丙酮的浓度及浓缩物中的黄水浓度都有直接关系。

④产品收集

糊状叶绿素比35％以下的稀丙酮轻，且不溶于35％以下的稀丙酮，因此，悬浮在浓缩液中形成悬浊液，当我们在放浓缩物的时候，一定要慢慢放入，并充分静置，使其糊水分离，一般静置1小时以上。这样既避免将糊从黄水(下脚水)中带走，又保证了糊水分离效果好

3：我们在实验室中提取叶绿素最简便的方法就是用丙酮（浓度96%）乙醇（浓度98%）1：1混合液，将叶片浸在溶液中，放在暗处2小时，便可提取的十分干净。

4：叶绿素的提取

▲ 将新鲜菠菜(Spinacia)叶片洗净擦干,去叶柄及叶脉.称取样品 8g,剪碎置研

钵内（加入少量碳酸钙）,加入8cm3丙酮及少许固体碳酸钠,迅速研磨成匀浆;然后再加入20cm3丙酮充分研磨.

▲ 在一玻璃漏斗底部垫一小团脱脂棉,将匀浆通过脱脂棉过滤至已装有20cm3石油醚

的分液漏斗中,再用少量的丙酮冲洗叶片残渣及研钵,合并滤液.

▲ 沿分液漏斗的壁小心加入40cm3蒸镏水,轻轻摇动,使色素转移到上面的石油醚层

静置数分钟,待分层清楚后弃去下面的丙酮一一水层.如发生乳化现象可加入2-3cm3饱和

NaCl溶液.

▲ 在分液漏中再加入40cm3蒸镏水,轻轻摇动,以洗去石油醚中残留的丙酮,共洗两

次.然后将叶绿素的石油醚提取液放入具塞锥形瓶中,置暗处或用黑纸包好备用。