大豆蛋白的提取与含量测定
大豆（学名：Glycine max），中国古称菽，是一种其种子含有丰富的蛋白质的豆科植物。大豆呈椭圆形、球形，颜色有黄色、淡绿色、黑色等，故又有黄豆、青豆、黑豆之称。蛋白质分子是含有酸性基团和碱性基团的两性电解质，在等电点时，蛋白质分子的酸性基团和碱性基团的解离度相等，成为带有正负电荷相等的两性离子，在电场中不向两极移动，并且极易沉淀。氨基酸组成不同的蛋白质，具有不同的等电点。根据在一定条件下（如PH，离子强度等）它们所带电荷的数量和种类，分子的大小及形状等方面的差异，可以采用电泳，离子交换柱层析等方法对它们进行分离分析。
试剂和器材
1、试剂
（1）10%Nacl （2）0.2%NaoH
（3）75%乙醇 （4）6mol/L HCL
（5） 1mol/L HCL （6）1 mol/L NaoH

2、器材
（1）离心机 （2）烧杯 （3）滴管
（4）PH试纸（5）自动型凯氏定氮仪等

操作方法
1、水抽提
将豆粉5g用约40毫升左右的蒸馏水少量多次的添加搅拌，常温下搅拌抽提15min， 3800r/min离心15min，取上清液，如上清液不清澈再经过滤。
取上清液1毫升稀释50倍留做蛋白测定。
其余清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用滴管少量多次慢慢滴加（搅拌）6mol/L和1 mol/L HCL，调PH4.5~5.0，3800r/min，离心15min，收集沉淀物，反复用丙酮搅拌洗涤离心2次，得到粉末状蛋白质干粉，称重，计算粗产率。

Folin酚法测定蛋白质含量  
目的要求
掌握Folin酚法测定蛋白浓度的原理和方法
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质，如比重、紫外吸收，折射率等测定而得知；或用化学方法，如定氮、双缩脲反应，Folin酚试剂反应等方法来计算。也可以用染色法，如氨基黑，考马斯亮蓝法测定。还可以用荧光激发法，氰胺　，放射性同位素计数等灵敏度较高的方法。在这些方法中，其中双缩脲法和Folin酚法是一般实验室中常用的方法，它们操作简便，迅速，不需要复杂而昂贵的仪器。Folin酚法灵敏度高，比双缩脲法灵敏100倍。
原理
Folin酚法是所用试剂是由两部分组成，试剂甲相当于双缩脲试剂，蛋白质中的肽键在碱性条件下可与铜离子起显色反应。试剂乙中的磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下不稳定，易被酚类还原而呈兰色（钼兰和钨兰混合物）。

由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸还原呈兰色，溶液兰色的深浅与蛋白浓度有较好的线性关系。因此用Folin酚法测定蛋白质含量，灵敏度较高。
样品中含酚类化合物及柠檬酸均有干扰作用，如果样品酸度较高则显色较浅，要提高碳酸钠一氢氧化钠的浓度。此法也可测定溶液中酪氨酸和色氨酸的浓度。
Folin酚法有不少具有操作方法，但基本原理都是一个，只是在各溶液的浓度及填加量上，保温的温度及保温时间上有所不同而已，本实验所介绍的是本室常用的，灵敏度较高的操作方法。

试剂和器材
1、材料：
本实验所提取大豆蛋白水提取液，经合适稀释至可测定范围。
2、试剂：
（1）0.03mol/L PH7.8的磷酸缓冲液。
（2）200μg/ml的标准酪（牛血清）蛋白溶液。
（3）Folin试剂甲：（俗称碱性铜试剂）：10g
NaoH溶于400ml水中，再加50gNa2CO3；
称取0.5g酒石酸钾钠溶于80mlH2O中，再加0.25gCuSO4；以上两溶液混合定容到500ml，冰箱保存可用一个月。

4、Folin试剂乙：在2升磨口回流装置的烧瓶内，加钨酸钠（NaWO4•2H2O）100g，钼酸钠（NaMoO•2M2O）25g，蒸馏水700ml，85%的磷酸50ml，浓盐酸100ml，充分混合后，小火回流10小时，再加硫酸锂（Li2SO4）150g，蒸馏水50ml及数滴溴。然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到1000ml，过滤后呈金黄色，于棕色并中保存，可使用多年。
蛋白质的测量可以使用仪器直接来进行测量，可以使用全自动定氮仪，它主要用来检测粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等中的氨氮、蛋白质氮等含量。检测方法符合国标、 AOAC、ISO等。