油脂 中脂肪酸含量测定

  ――― 气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分 

    油脂是食品加工中重要的原料和辅料，也是食品的重要组分和营养成分。必需脂肪酸是维持人体生理活动的必要条件，人体所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。气象色谱法测定油脂脂肪酸组分是现在最常用的方法，也是一些相关标准（如：GB/T17377）规定应用的检测方法。

    甲酯化是分析动植物油脂脂肪酸成分的常用的前处理方法，也是常用的标准方法（GB/T 17376-1998）。 

二、原理

    本实验甲酯化方法采用国标--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，释出的脂肪酸在三氟化硼存在下进行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于气象色谱分析。

    样品中的脂肪酸（甘油酯）经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分，到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性，归一法确定不同脂肪酸的百分含量。 

三、仪器与试剂

（一）仪器

    1．气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（FID）。

    2．恒温水浴锅

    3．移液管

    4．胶头滴管

    5．小圆底烧瓶

    6．冷凝管

    7. 样品瓶

（二）试剂

    1.正己烷：分析纯，沸程60～90℃或30～60℃，重蒸。

    2.氢氧化钾甲醇溶液

    3.三氟化硼甲醇溶液

    4.饱和食盐水

    5.市售大豆油

四、实验步骤

（一）样品预处理

甲酯化：

    取2~4滴大豆油样品于xml的圆底烧瓶中，加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止3~5min，取上层油样1ml于试样瓶中，进GC分析。 

测定：

（1）气相色谱条件

    ①色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.25mm（内径）×60m，内膜厚度0.32。

    ②程序升温： 150℃保持3min，5℃/min升温至220℃，保持10min；进样口温度250℃；检测器温度300℃。

    ③气体流速：氮气：40mL/min，氢气：40mL/min，空气：450mL/min，分流比30﹕1。

    ④柱前压：25kpa

（2）色谱分析

    自动进样，吸取1μL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。利用标准图谱确定每个色谱峰的性质（定性），利用软件自带的自动积分方法计算各脂肪酸组分的百分含量。

五、注意事项

1．本法检测灵敏度高，在分析时应注意防止由于色谱柱中高沸点固定液、样品净化不完全及载气不纯等带来的污染，使其灵敏度下降。

2．本方法采用极性色谱柱，样品处理时应尽力保证脱水彻底。

3．本实验采用自动进样，序列采集，工作站在序列运行之后不再允许更改序列采集方法，所以在运行某一序列之前应确认程序编辑无误。

4．为了保护毛细管柱，一定要确认升温程序在该型号色谱柱的温度允许范围内。