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畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法 GB/T 14931.1-94

(高效液相色谱法)

Method for determination of oxytetracyline tetracyline and

chlortetracycline residues in meat (HPLC)

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1　主题内容与适用范围

本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。

本标准适用于各种食用畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓度为：0.15，0.20, 0.65mg/kg。

2　原理

样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。

3　试剂

3.1　乙腈(分析纯)。

3.2　0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液：称取1.56 g(±0.01g)磷酸二氢钠(NaH2PH4.2H2O)溶于蒸馏水中，定容到100 mL，经微孔滤膜(0.45 μm)过滤，备用。

3.3　土霉素(OTC)标准溶液：称取土霉素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L盐酸溶液每毫升含土霉素1mg。

3.4　四环素(TC)标准溶液：称取四环素0.0100g(±0.001g)，用0.01 mol/L盐酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四环素1mg。

3.5　金霉素(CTC)标准溶液：称取金霉素0.0100g(±0.0001g),溶于蒸馏水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。

以上标准品均按1000单位/mg折算。3.3～3.5溶液应于4℃以下保存，可使用1周。

3.6　混合标准溶液：取3.3、3.4标准溶液各1.00 mL，取3.5标准溶液2.00 mL，置于10mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各0.1mg，金霉素0.2mg，临时现配。

3.7　5％高氯酸溶液。

4　仪器

4.1　高效液相色谱仪(HPLC)：具紫外检测器。

5　色谱条件

5.1　柱：ODS-C18 (5 μm)　6.2mm×15 cm。

5.2　检测波长：355 nm。

5.3　灵敏度：0.002 AUFS。

5.4　柱温：室温。

5.5　流速：1.0mL/min。

5.6　进样量：10 μL。

5.7　流动相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液(用30％(V/V)硝酸溶液调节pH2.5),35:65(V/V)，使用前用超声波脱气10 min。

6　操作方法

6.1　样品测定：称取5.00 g(±0.01 g)切碎的肉样(＜5 mm)，置于50 mL锥形烧瓶中，加入5％高氯酸25.0mL，于振荡器上振荡提取10 min，移入到离心管中，以2000 r/min离心3min,取上清液经0.45μm滤膜过滤,取溶液10μL进样, 记录峰高，从工作曲线上查得含量。

6.2　工作曲线，分别称取7份切碎的肉样，每份5.00 g(±0.01 g)，分别加入混合标准溶液0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四环素各为0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg, 含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg), 按6.1方法操作、以峰高为纵坐标, 以抗生素含量为横坐标, 绘制工作曲线。中国粮油仪器网 http://www.grainyq.com